El diagnóstico de Laboratorio no es concluyente
en este proceso, debido a la presencia del germen en animales
completamente sanos.
Dado que el cultivo es muy lento y engorroso y no asequible
a la mayoría de los laboratorios, el aislamiento
e identificación de M. hyopneumoniae no es
un método rutinario de diagnóstico.
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El aislamiento
de M. hyopneumoniae se realiza a partir de tejido pulmonar
o de moco traqueal. La presencia en pulmón de
otros micoplasmas de crecimiento más rápido,
como M. hyorhinis, dificulta el aislamiento y la identificación.
En estados crónicos de la enfermedad, cuando los resultados
con otras pruebas de diagnóstico tales como IF, ELISA
o PCR, son negativos, han de ser confirmados mediante el cultivo.
Se han desarrollado y utilizado
técnicas inmunocitoquímicas para demostrar la
presencia de M. hyopneumoniae en tejido pulmonar como
son, la IFD (Inmunofluorescencia Directa) y la Inmunoperoxidasa
indirecta.
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La IFD se basa en la utilización
de un anticuerpo policlonal conjugado con un fluorocromo sobre
cortes de tejido pulmonar en congelación, obtenidos
en zonas de pulmón sanas y de zonas con la lesión
característica de la Neumonía Enzoótica.
Esta técnica es útil en
el diagnóstico de la fase aguda de la enfermedad,
cuando existen grandes cantidades de micoplasmas en el pulmón;
pero la presencia del micoplasma en la lesión no excluye
la presencia de otros agentes ni determina el carácter
del proceso en cuanto a ser agudo o crónico; además
en lesiones muy antiguas (procesos crónicos) pese a
obtenerse las muestras de lesiones neumónicas claras
no se puede demostrar a presencia de M. hyopneumoniae
en la lesión, hecho que se explicaría por que
el numero de micoplasmas desciende, a medida que se el proceso
se hace crónico.
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La técnica de la inmunoperoxidasa indirecta
fue aplicada por primera vez para el diagnóstico de
M. hyopneumoniae sobre cortes de tejido pulmonar fijados
en formol e incluidos en parafina. La
sensibilidad de inmunoperoxidasa sobre cortes en parafina
es muy alta, pero plantea la misma problemática que
la IFD en casos crónicos.
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Actualmente la mayoría
de los laboratorios trabajan con métodos serológicos
(detección de anticuerpos); estos métodos además
de permitir muestrear un gran número de animales, permiten
conocer con mas exactitud que las anteriores la prevalencia
y la dinámica del comportamiento de la enfermedad
dentro de una explotación; así como el momento
de exposición al agente. Permiten también comprobar
eficacia de los programas de control, eficacia de los programas
de vacunación y junto con el diagnóstico anatomopatológico
evaluar los programas de erradicación. Entre los principales
métodos serológicos utilizados están,
Hemoaglutinación Indirecta (HI), Fijación de
Complemento (FC), y ELISA (o Enzimoinmunoensayo). Entre todos
estos el mas utilizado es la técnica de ELISA, por
su capacidad rutinaria de procesar grandes volúmenes
de muestras.
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La HI tiene alta especificidad y sensibilidad,
pero su ejecución no es fácil para todos los
laboratorios por lo que no se realiza de forma rutinaria.
A partir de lavados pulmonares detecta todas las Ig, aunque
de forma mas marcada en las IgA; útil en el diagnóstico
de infecciones tempranas. Presenta poca correlación
con las técnicas de FC y ELISA.
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La FC es una técnica con alto grado
de sensibilidad y especificidad, para grandes volúmenes
de muestras el laboratorio requiere cierto grado de experiencia
en la técnica, aunque con esta salvedad puede ser una
técnica rutinaria asequible, los anticuerpos frente
a M. hyopneumoniae se detectan a las dos semanas de la exposición
a la bacteria (postinfección), pero no se detectan
pasados cinco meses postinfección. Además presenta
otra desventaja, detecta IgM, cuya vida en el suero es muy
corta.
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La
técnica ELISA tiene un alto grado de sensibilidad y especificidad.
Además de IgM detecta IgG; que son los anticuerpos que
permanecen mas tiempo en suero, lo que la hace mas ventajosa
que con FC. Se utiliza un ELISA de bloqueo, por ser el
que mas minimiza los problemas de reacciones cruzadas con otros
micoplasmas, basado en la utilización de un anticuerpo
monoclonal contra la proteína de 74 KDa de M. hyopneumoniae.
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| La técnica
de ELISA detecta anticuerpos desde las dos, tres semanas del
contacto con el micoplasma, el momento de aparición y
la tasa de anticuerpos esta en función de la edad a la
que se infectan los lechones. En infecciones a las seis
semanas de edad los anticuerpos aparecen a las tres semanas
postinfección, alcanzan el pico máximo a las 8
semanas y descienden progresivamente hasta desaparecer al año
después de la infección. En animales infectados
a las dos semanas de edad, aparecen anticuerpos a las dos semanas
seguidas a la infección, siendo además mayor la
tasa de anticuerpos que cuando se infectan a las 8 semanas.
En otras pruebas realizadas con la técnica de ELISA se
observa que después de infectar animales con dos semanas
de edad, aparecen anticuerpos a las tres semanas de edad, produciéndose
el pico mas alto a las 10-12 semanas postinfección y
después los anticuerpos van cayendo regularmente. Se
puede concluir que en animales infectados en las primeras semanas
de vida la técnica de ELISA detecta anticuerpos a las
2-3 semanas postinfección, alcanzándose la respuesta
mas alta entre las 8-12 semanas postinfección y a partir
de aquí decaen hasta desaparecer al año, si no
ha habido reinfecciones durante este periodo. |
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También se han desarrollado técnicas
de PCR para evidenciar la presencia de M. hyopneumoniae
en tejido pulmonar, en escobillones con exudado nasal y en liquido
procedente de lavados traqueobronquiales, con resultados muy
positivos. Estas técnicas están basadas
en el análisis de la secuencia de ADN mediante la utilización
de primers (iniciadores). Presentan mayor especificidad y sensibilidad
que las anteriores. Se recomiendan en el control de programas
de erradicación para vigilar si se producen recontaminaciones
de las granjas donde se ha erradicado. |
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Es importante establecer un diagnostico diferencial,
fundamentalmente porque M. hyopneumoniae interacciona
con los otros patógenos respiratorios del cerdo y es
necesario conocer que organismos están implicados en
las lesiones neumónicas que se observan; además
la mera presencia de M. hyopneumoniae en pulmón
o vías respiratorias no implica necesariamente que
se desarrolle la enfermedad, se ha demostrado que entre la
infección y el desarrollo de la enfermedad puede pasar
un mes o incluso, aunque no frecuente, algo mas de tiempo.
Tabla 2
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| Tabla 2. Diagnóstico diferencial
que se recomienda para la Neumonía Enzoótica: |
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Naturaleza
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Curso
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Síntomas
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Lesiones
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Edad animales
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| Influenza Porcina |
Vírica
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Agudo,
Morbilidad alta. |
Fiebre alta, tos, disnea. |
Zonas necróticas
focales en pulmón. |
Cualquiera, incluida madres. |
| Enfermedad de Aujezsky |
Vírica
|
Agudo,
Morbilidad alta
Mortalidad alta. |
Cebo: tos, postración,
fiebre, vómitos, orquitis. Lechones: síntomas
nerviosos.
Madres: Abortos. |
Cebo: Neumonía
catarral, tonsilitis.Lechones: zonas necróticas
en hígado. |
Cualquiera, incluida madres. |
| PRRS |
Vírica
|
Lento, pasa a crónico
rápidamente |
Lechones y cebo:
trastornos respiratorios en general, casi siempre inaparentes.
Madres: trastornos reproductivos. |
Lechones y cebo: neumonía
intersticial, lesiones por otros procesos secundarios. |
Cualquiera, incluida madres. |
| Actinobacillus
pleuropneu-moniae |
Bacteriana
|
Hiperagudo, Agudo, Subagudo,Crónico.
Alta mortalidad. |
Fiebre, disnea, postración. |
Pleuritis fibrinosa, neumonía
necrótico/hemorrá-gica. |
Lechones desde 6-7 semanas
en adelante. |
| Haemophillus parasuis |
Bacteriana
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Crónico |
Respiratorios inespecíficos. |
Poliserositis,
Poliartritis en la fase de cebo. |
Lechones desde 3 semanas
en adelante. |
P.
multocida tipo A,
B. Bronchiseptica, Estreptococos, etc. |
Bacteriana
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Todos ellos son agentes
secundarios, complicantes en los procesos neumónicos
producidos por patógenos primarios. |
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